液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一,其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中,難免會出現(xiàn)各種各樣的問題,并將直接影響到所測數據的準確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚預防和排除這些故障的方法,就可正確地使用儀器并zui大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用液相色譜儀中需注意的幾個問題。
液相色譜儀使用注意事項
流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。
流動相過濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應該恢復到室溫后使用。
不能用純乙腈作為流動相,這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。
使用緩沖溶液時,做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時,然 后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。
長時間不用儀器,應該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應該用有機相(如甲醇等),因為純水易長霉。
每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。
C18柱不能進蛋白樣品,血樣、生物樣品。
堵塞導致壓力太大,按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法;①以異丙醇作溶劑沖洗:②放在異丙醇中間用超聲波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。
氣泡會致使壓力不穩(wěn),重現(xiàn)性差,所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。
如果進液管內不進液體時,要使用注射器吸液:通常在輸液前要進行流動相的清洗。
要注意柱子的pH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。
更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗,然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。